“一针治愈”的基因疗法带给了遗传性疾病和获得性疾病一针治愈的希望,在基因治疗领域,重组腺相关病毒(rAAV)因其低致病性、对宿主免疫原性弱、长期稳定表达以及广泛的细胞和组织亲嗜性等优点,被视为最有前途的基因治疗载体。
迄今为止,全球已获批上市的AAV基因疗法共有8款,国内有44款AAV基因药物IND申报获批,4款进入临床三期。
尽管腺相关病毒作为基因治疗的重要载体,已显现出巨大前景,但是AAV的产业化生产仍面临着诸多痛点,尤其在下游纯化工艺中,如产品纯度、不完整和空衣壳的去除、可放大性上都面临着一系列挑战。
表1:各种纯化方法比较
AAV纯化解决方案
传统的AAV病毒颗粒纯化方法通常采用碘克沙醇密度梯度离心,这种方法操作繁琐,耗时长且回收率低。为了更好地解决以上问题,我们采用磁珠技术开发出了AAV磁珠纯化产品,它适用于多种血清型,操作简单、快速且纯化率高,并且纯化所得的病毒颗粒可直接用于下游试验。
产品特点
1
应用范围广:适用于多种血清型、(已验证2、5、8、9、B10血清型);
2
操作简便:无需进行超离心等繁琐操作,对仪器设备要求低;
3
实验周期短:整个纯化过程仅需1个半小时即可搞定;
4
磁珠载量大:亲和磁珠结合载量可达3-5E+11vg/mg;
实验数据
丨纯化后的AAV纯度测定
纯化后样本纯度测定,SDS-PAGE能够确认到以AAV衣壳蛋白 VP1、VP2和VP3 为主的电泳条带。
AAV电泳图
丨纯化后 AAV 病毒的感染力评价
将纯化后的 AAV病毒进行多个梯度稀释,并侵染 293T 细胞,通过荧光显微镜观察可以看到,稀释 1000 倍后有很高的荧光强度,随着稀释倍数的增大 AAV 侵染细胞的数量逐渐减少,但稀释 105 倍后仍有少量细胞带有荧光。证明洗脱的病毒具有很高的活性。
AAV病毒洗脱液稀释102、103、104、105 倍侵染 293T细胞荧光结果
产品信息
产品试用
复百澳生物拥有专业的研发生产团队,致力于为IVD及CGT领域提供病毒相关产品及服务,为感谢新老客户一直以来的支持,本次新品特推出20个试用名额,数量有限,先到先得。
申请时间:2024年11月6日-2024年11月30日。
发货时间:2024年11月15日-2024年12月15日。
扫码申请试用
活动规则:
1.申请试用需在30天内提交试用反馈。
2.每人或每家单位仅可申请一份试用装,数量有限,先到先得;
3.申请表需如实填写信息,以便工作人员审核及发放试用装;
4.试用申请扫描二维码填写申请表,申请试用装!
参考文献
1. Chen, Y. H., et al. "Adeno-Associated Virus Production, Purification, and Titering." Curr Protoc Mouse Biol (2018).
2. Blessing, D., et al. "Scalable Production and Purification of Adeno-Associated Viral Vectors (AAV)." Methods Mol Biol (2018).