中和抗体假病毒技术介绍
假病毒(Pseudovirus)是一种通过病毒包膜蛋白替换技术构建的嵌合病毒,其核心特点是保留一种病毒的基因组(复制缺陷 型逆转录病毒或水疱性口炎病毒的基因组),但包膜蛋白(envelope)来自另一种病毒。从而组装成具有侵染能力的假病毒。
基孔肯雅热中和抗体假病毒是利用逆转录病毒载体改造的,把逆转录病毒的 VSVG 包膜蛋白换成 CHIKV 的部分外壳蛋白,在细胞内自我组装形成病毒样颗粒(Virus-like Particle,VLP)并分泌胞外。该假病毒包膜蛋白结构高度类似活病毒,可模拟真病毒与特异识别受体结合并诱导膜融合进入细胞的过程。该假病毒具有单轮感染能力,感染特定细胞系后可表达绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luciferase),安全性好。

产品结构示意图
产品感染活性检测示例图

CHIKV中和抗体假病毒感染目的细胞48H后表达绿色荧光和萤火虫荧光素酶
产品应用
1)用于中和抗体效价评价、疫苗体内效力测试;
2)用于评价治疗药物在抗病毒机制研究中的作用。
丨使用方法
1. 细胞准备:实验前一天,将待感染细胞接种于96 孔细胞培养板中,接种量约为 1x104 个细胞/孔,次日进行病毒感染时, 细胞密度在 40%左右为佳;
2. 假病毒感染:取出冻存的假病毒置于冰上融化或 4±1℃条件下自然融化,待其完全融化后,吸取所需量病毒(可设计浓 度梯度)加入细胞培养体系中感染目的细胞。以 HEK293T细胞为例,加入病毒量 2-10μL/孔,病毒感染后6-8H 后更换新 鲜培养基继续培养;
3. 感染检测:细胞感染假病毒 48-72H 后,通过观察绿色荧光蛋白表达和检测荧光素酶的活性判定感染效率。
4. 补充:假病毒对不同细胞的感染效率不同,正式实验前建议进行预实验,以确定最适病毒量。
丨注意事项
1)本产品的只承诺在HEK293T细胞侵染效率,其他细胞不做承诺。
2)我们提供的 Pseudovirus-CHIKV-Asia 假病毒为复制缺陷型病毒,即该病毒感染目的细胞后不会利用宿主细胞产生新的病 毒颗粒;
3)实验操作需要在 BSL-2 实验室和 ClassⅡ生物安全柜条件下进行,并穿戴好实验服、口罩和手套等个人防护用品;
4)如果实验时本品不慎溅出,请立即使用 84 消毒液对其进行灭活处理,如果溅到眼睛、皮肤或其他身体部位请立即使用大量 清水冲洗;
5) 使用本品所产生的实验废弃物需要通过高压灭菌处理后按照医疗废弃物处理要求进行处理。
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