产品涵盖临床免疫诊断、分子诊断、高通量测序和生命科学研究等领域
乙肝造模(AAV-HBV)

【产品背景】

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virusHBV),是引起人类急慢性肝炎的主要病原体之一。HBV有较强的种属特异性,自然状态下仅侵袭灵长类动物(人类和黑猩猩),由于伦理及经济制约,利用黑猩猩进行HBV 感染的生物学及免疫学研究受到很大的限制。虽然树鼩模型的应用在HBV 慢性感染的机制研究方面取得重要进展,但树鼩的感染率不高,仅能引起瞬时感染。因此建立操作简单、经济实用的小鼠模型是HBV研究的发展趋势。

【构建原理】

通过AAV 病毒载体(静脉注射AAV-HBV)将HBV病毒基因组运送到小鼠肝脏细胞来模拟HBV感染可获得遗传背景均一的小鼠模型,广泛用于HBV药物研究中。目前,乙型病毒性肝炎小鼠模型是AAV应用于动物肝脏疾病模型构建最成功的案例之一。乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒 (Hepatitis Bvirus,HBV) 引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官功能障碍的传染病。利用8 型腺相关病毒携带1.3 拷贝HBV基因组(rAAV8-1.3HBV)建立一种持续感染的HBV小鼠模型,此AAV介导的成模方法不仅成模效率高,HBV感染能够维持较长时间,为HBV的感染或致病机制与抗病毒药物或疫苗的筛选等研究提供了新的动物模型。

【产品应用】

1)用于制备慢性乙肝模型、HBV持续复制模型小鼠动物模型;

2)用于研究乙肝病毒复制机制及新药物的开发。

【产品优势】

成膜效率高:低至4×109ug/只剂量的重组病毒即可;C57BL/6和BALB/c两种品系小鼠100%成模;

均一性及稳定性:注射相同剂量的rAAV8-1.3HBV,小鼠血清中可持续检测到HBsAg和HBeAg以及HBV DNA水平高低相近,模型的均一性好;

良好的量效关系:血清中HBsAg和HBeAg的水平以及HBV DNA水平与rAAV8-1.3HBV的注射量(1+9 ~ 1+12 ug/只)呈正相关,HBV动物模型血清中HBsAg和 HBeAg的水平以及HBV DNA水平可按实验需求进行控制;

适用范围广:可尝试在不同动物包括非人灵长类动物中建立HBV动物模型。目前该模型已广泛应用于HBV药物评价和筛查的研究。

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  • FAAV8-8597
  • AAV8-1.3xHBV(C,adr)
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【使用方法】

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1)使用4-6周Balb/c小鼠,推荐剂量为1E+11~3E+11vg/只,注射体积为200µL/只,采用尾静脉注射方式给药。注射前用无菌 PBS将产品稀释至需要的基因组滴度(vg/mL)。

2)一般AAV8-1.3xHBV感染动物3-4周后,可以检测到动物体内HBV DNA的复制,HBsAg和HBeAg的持续表达,由于实验动 物个体差异和外部环境的影响,表达水平及持续时间可能而有所差异,建议在正式实验之前,根据所选动物和实验目的进 行3~4个注射量的梯度测试,进行剂量条件优化

【效果展示】

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【注意事项】

1)病毒储存时间超过6个月后,建议在使用前重新测定滴度; 

2)感染AAV8-1.3xHBV的.小鼠排泄物等可能含有HBV病毒,该HBV病毒有潜在感染性和致病性,实验动物及废弃物的处理 需要严格遵循生物安全实验规程;

3)由于不同批次间产品的病毒滴度与感染活性略有波动,建议在使用新批次产品时进行剂量条件优化; 

4)病毒产品及实验过程,应在生物安全二级条件下进行。