·产品概述
本产品是基于不同型别的人乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus，HPV）的衣壳蛋白L1和L2共同在293T细胞内表达后，自我组装形成的病毒样颗粒（Virus-like Paricle，VLP），同时将含有报告基因的核酸序列包裹在假病毒内部。该假病毒结构高度类似活病毒，并具有单轮感染细胞活力，可表达报告基因，安全性好。
·产品应用
1）用于抗HPV血清中和抗体效价测试
2）单抗中和抗体滴度检测。
·检测原理
中和抗体是可以特异识别病毒表面的抗原中和位点，阻止病毒入侵细胞繁殖，保护机体免受其害，具有真正的抗病毒作用。HPV中和抗体假病毒含有病毒的中和抗原，且具有感染细胞活力；中和抗体可以识别HPV假病毒，并发生中和反应，降低HPV假病毒感染能力，导致携带的报告基因（如绿色荧光蛋白zsGreen等）表达量减弱。通过Elispot读数仪扫描计数每孔的荧光斑点数，将待测样品孔的数值与假病毒对照组的数值进行比较，可计算待测样品的抑制百分比。计算当50%假病毒被抑制时抗体的稀释倍数的倒数即中和抗体滴度。
HPV假病毒感染293T细胞72 h后检测荧光素酶表达
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丨实验材料
1、实验试剂
293T细胞、DMEM培养基、胎牛血清、PBS、0.25%胰酶、血清或抗体、荧光素酶检测试剂盒
2、实验设备
生物安全柜、荧光倒置显微镜、CO2细胞培养箱、离心机、Elispot读数仪、水浴锅、移液器（单道、多道）、电动移液 器、96孔细胞培养板
丨实验流程（以血清样本为例）
HPV中和抗体假病毒实验流程图
丨实验步骤
1、细胞铺板
取对数生长期的293T细胞进行胰酶消化，计数后制成1 x 105 cells/mL细胞悬液，96孔板每孔接种100 µL细胞液，置于37℃、 5%CO2 细胞培养箱中继续培养。
2、血清准备
a）血清样品置于56℃水浴锅中加热30 min（建议加热，去除补体干扰）；
b）稀释：使用DMEM培养基对血清样本进行稀释，分别进行系列梯度稀释，作为独立血清样品进行中和抗体检测。
3、假病毒稀释
从-80℃超低温冰箱中取出假病毒置于冰上或4℃条件下融化，待其完全融化后短暂离心，使病毒液聚集于保存管底，依据报告中假病毒滴度和实验方案设计进行系列稀释（1TCID50=1荧光斑点）；建议96孔板每孔加入0.1µL假病毒液。 因假病毒对不同来源的293T细胞感染效率不同，建议正式实验前进行预实验，以确定最适病毒量。
4、待测血清样品和假病毒稀释液预孵育
将稀释的待测血清样品与假病毒稀释液进行等体积混合，同时设置细胞对照（DMEM培养基，100 µL/well）、假病毒对照（假病毒稀释液与DMEM培养基等体积混合），放入37℃、5%CO2培养箱中孵育1 h。
5、感染细胞
孵育结束后各取100 µL混合液（包括细胞对照、假病毒对照）贴壁缓慢加入已经接种好细胞的96孔板对应孔中，贴着工作台面轻轻划“十”字混匀，放入37℃、5%CO2培养箱中培养72 h。
6、感染检测
病毒感染细胞72 h后，取出96孔板置于荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达效率，拍照记录； 使用Elispot荧光斑点计数仪进行检测，计算感染抑制率（%）；
7、结果判定
1）结果判断：中和抗体检测实验过程中需设置假病毒对照、细胞对照，来判定实验是否成立。
丨注意事项
1）建议提前进行预实验，通过预实验计算出合适的假病毒使用浓度；
2）本产品仅供HPV抗血清或中和抗体滴度体外检测；
3）假病毒、待测血清样本避免反复冻融；
4）血清梯度稀释时注意不要产生气泡；
5）所有实验操作过程均需要在II级生物安全柜内进行，实验过程中产生的废弃物均需进行高压灭菌处理，并按医疗废弃 物处理要求进行后续处理；
6）假病毒为微量体积，使用前请短暂离心后再取样进行操作。
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