微信公众号

研究性服务
细胞功能学实验

Fubio(复百澳)生物公司拥有BD Biosciences FACSAria II流式细胞仪、Nikon Eclipse Ti-U倒置荧光显微镜、安全柜和培养箱等多种细胞功能实验设备和仪器,建立成熟的细胞技术服务平台可为客户提供病毒包装、细胞感染、稳定株细胞株筛选、细胞周期检测、细胞凋亡检测、细胞迁移等多种实验。

部分实验结果展示:

 

部分实验方法说明:

1. 细胞周期检测:

a. 消化细胞,使细胞完全单个, 1500rmp × 5min 离心,弃离心上清;

b.  用预冷的PBS液洗涤细胞沉淀1次,1500rmp × 5min 离心,吸弃离心上清;

c.  70% 4℃预冷的乙醇水溶液重悬沉淀,4℃固定一小时或或更长时间 ;

d.  固定完毕后1500rmp × 5min离心,弃去上清,PBS洗涤细胞一次,同步骤;

e.  细胞染色(PI),上机检测(Cytomics™ FC500 流式仪)。

2. 细胞凋亡检测 (紫外诱导凋亡法)

a. 实验前24小时,将个突变基因的稳定细胞株传代于6孔板中,约50000细胞/孔;

b. 实验时,移去原有的细胞培养基,每孔补充500ul信新鲜培养基,使其在紫外照射过程中保持湿润状态。打开细胞培养板的盖子,用紫外灯垂直照射5min后,每孔再补给2ml新鲜培养基,继续培养24H

c. Annexin V-APC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒进行染色,用Beckman  Cytomics™ FC 500流式细胞仪进行凋亡实验检测。

3. 划痕实验(面积计算法)

a. 实验前24小时,将各突变基因的稳定细胞株传代于24孔板中,约30000个细胞/孔。

b. 实验时用20ul的微量移液管吸头,进行划痕,划痕宽度约200um。用PBS清洗一遍后更换新鲜配制的10% FBSDMEM培养基,选定并标记三个测量点,对其进行拍照并测量划痕区域面积,记为0 H起始时间面积。

c. 划痕后12H24H再分别对标记点进行拍照和面积测量,分别记为12H24H的划痕区域面积。

d. 生长速度以在相同时间内,细胞向划痕区域的生长面积的百分比计算:(12H(或24H划痕区域面积-0H划痕区域面积)/0H划痕区域面积 *100%

返回上级