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研究性服务
甲基化分析

DNA甲基化研究是表观遗传学的重要内容,真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰的方式在脊椎动物的胚胎发育过程中起着重要的调控作用,参与多种疾病包括各种肿瘤的发病机理,是目前表观遗传学研究的热点。

 

主要技术原理

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而发生甲基化的胞嘧啶不变。根据某一待测位点或者调查的某一区域序列设计引物进行PCR扩增,通过PCR电泳、测序、荧光定量及质谱等方法对扩增产物进行检测,根据检测结果分析哪些位点发生了甲基化及其甲基化的频率。

主要服务方案

1、甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)

      用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。设计针对某一待测位点的甲基化和非甲基化引物进行PCR扩增,通过电泳检测MSP扩增产物判定待测样本是否存在甲基化位点。

2、亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

     用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。针对要调查的区域设计BSP引物进行PCR扩增,对扩增产物进行测序就可以判断哪些CpG位点发生了甲基化;一般将PCR产物克隆后进行测序成功率会比较高。

实验流程:

1. BSP引物设计:针对感兴趣的基因区域进行BSP引物的设计(扩增产物不超过400bp)

2. 亚硫酸氢盐处理基因组DNA:提取基因组DNA并进行亚硫酸氢盐的转化

3. PCR扩增目的片段:BSP引物扩增感兴趣的区域

4. 克隆到载体:将PCR产物纯化后连接到载体上

5. 克隆测序:挑取阳性菌斑,提取质粒并测序(通常测序5个或10个克隆)

6. 序列分析:对测序的结果进行比对和甲基化分析

服务周期

 样本收到后15~20个工作日内完成。

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